我們向裂解液中加入針對某個已知蛋白(誘餌蛋白)的特異性抗體,抗體與誘餌蛋白結(jié)合形成抗原 - 抗體復(fù)合物。如同 IP 免疫沉淀一樣,借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠等固相載體,將抗原 - 抗體復(fù)合物從復(fù)雜的裂解液中分離出來。此時,與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)(獵物蛋白)也會隨著誘餌蛋白一起被沉淀下來,從而實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)復(fù)合物的富集和分析,幫助我們了解細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。實(shí)驗流程上,首先同樣是細(xì)胞或組織的裂解。通過免疫沉淀,可從復(fù)雜樣本中富集特定蛋白,為功能研究和疾病診斷提供支持。anti DYKDDDDK免疫沉淀選磁珠還是瓊脂糖珠
比如在開發(fā)抗病毒藥物時,利用免疫沉淀技術(shù)研究病毒蛋白與宿主細(xì)胞蛋白的相互作用,有助于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn),為開發(fā)更有效的抗病毒藥物提供理論依據(jù)。在農(nóng)業(yè)科學(xué)中,免疫沉淀技術(shù)可用于研究植物與病原體之間的相互作用。通過分析植物在病原體后,細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的變化,有助于培育具有更強(qiáng)抗病性的作物品種。盡管免疫沉淀技術(shù)已相當(dāng)成熟,但科研人員仍在不斷改進(jìn)和創(chuàng)新。未來,隨著微流控技術(shù)、超高分辨率質(zhì)譜技術(shù)等新興技術(shù)與免疫沉淀技術(shù)的融合,我們有望在單細(xì)胞乃至單分子水平上,更精細(xì)地解析生物分子的相互作用,為攻克疑難疾病、推動生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供更強(qiáng)大的技術(shù)支持。免疫沉淀技術(shù)將持續(xù)助力生命科學(xué)的探索,為人類認(rèn)識生命本質(zhì)、改善生活質(zhì)量帶來更多突破。廣州蛋白免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨未來,免疫沉淀與新興技術(shù)融合,將在單細(xì)胞水平、空間蛋白質(zhì)組學(xué)等前沿領(lǐng)域大顯身手。
首先是樣品制備,對于細(xì)胞樣品,需要選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)條件,確保細(xì)胞處于正常生理狀態(tài)。收集細(xì)胞后,使用特定的裂解液進(jìn)行裂解,裂解液的成分需精心調(diào)配,既要保證細(xì)胞充分破碎,釋放出細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì),又要避免破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與活性。裂解過程通常在低溫環(huán)境下進(jìn)行,以減少蛋白酶對蛋白質(zhì)的降解。細(xì)胞裂解完成后,將裂解液與特異性抗體混合,在適宜的溫度和時間條件下孵育,促進(jìn)抗體與目標(biāo)蛋白的結(jié)合。一般來說,4℃孵育可以降低非特異性結(jié)合,提高實(shí)驗的特異性。
Co-IP(免疫共沉淀)是一種用于研究蛋白質(zhì)間相互作用的實(shí)驗技術(shù),它基于抗原-抗體反應(yīng)的特異性,通過特定的抗體將目標(biāo)蛋白質(zhì)及其與之相互作用的蛋白質(zhì)從復(fù)雜的生物樣本同沉淀下來。這項技術(shù)自誕生以來,就因其獨(dú)特的優(yōu)勢而在蛋白質(zhì)組學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。Co-IP技術(shù)不僅能夠幫助科學(xué)家們揭示蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系,還能為理解生命活動的復(fù)雜性和多樣性提供重要線索。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,Co-IP技術(shù)也在不斷完善和創(chuàng)新,為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究注入了新的活力。憑借 anti DYKDDDDK,免疫沉淀可高效富集含該標(biāo)簽蛋白,為分析提供高純度樣本。
免疫沉淀技術(shù)在生命科學(xué)研究領(lǐng)域占據(jù)著舉足輕重的地位,它猶如一把精細(xì)的 “分子鑷子”,能夠從復(fù)雜的生物樣品中巧妙地分離出特定的蛋白質(zhì)及其相互作用伙伴。其原理基于抗原與抗體之間高度特異性的結(jié)合反應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞在溫和的非變性條件下被裂解時,細(xì)胞內(nèi)原本存在的蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì) - DNA 或蛋白質(zhì) - RNA 等相互作用得以很大程度地保留。此時,向裂解液中加入針對目標(biāo)蛋白的特異性抗體,抗體便會迅速與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成抗原 - 抗體復(fù)合物。隨后,借助 Protein A 或 Protein G 等能夠與抗體 Fc 段緊密結(jié)合的介質(zhì),如 Protein A - 磁珠或 Protein G - 磁珠,將抗原 - 抗體復(fù)合物從混合體系中高效沉淀下來。,通過適當(dāng)?shù)南疵摲椒ǎ瑢⒛繕?biāo)蛋白從磁珠上洗脫,即可獲得相對純化的目標(biāo)蛋白樣品,用于后續(xù)的深入分析。免疫沉淀操作中,合適抗體的選擇是決定能否成功捕獲目標(biāo)抗原的重要前提。上海ChIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨
免疫沉淀技術(shù)搭配質(zhì)譜分析,能準(zhǔn)確鑒定免疫復(fù)合物中的蛋白質(zhì)成分。anti DYKDDDDK免疫沉淀選磁珠還是瓊脂糖珠
免疫沉淀的基本實(shí)驗步驟包括樣品制備、抗體孵育、復(fù)合物捕獲、洗滌和洗脫。首先,樣品(如細(xì)胞裂解液或組織提取物)需要經(jīng)過裂解和離心處理,以釋放目標(biāo)蛋白并去除不溶性成分。接下來,特異性抗體與樣品中的目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。為了捕獲復(fù)合物,通常使用與抗體Fc段結(jié)合的固相載體(如ProteinA/G瓊脂糖珠)。經(jīng)過多次洗滌去除非特異性結(jié)合的蛋白后,目標(biāo)蛋白可以通過改變緩沖液條件(如低pH值或添加還原劑)從固相載體上洗脫下來。anti DYKDDDDK免疫沉淀選磁珠還是瓊脂糖珠